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ELISA試劑盒做標準曲線樣品檢測時的注意事項
更新時間:2020-11-27   點擊次數:856次
  ELISA試劑盒檢測方法的局限性:
  ① 樣本檢測結果不樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;
  ②樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;
  ③陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;
  ④病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;
  ⑤不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;
  ⑥試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果
  樣本采集、存放及運輸:
  1、費用樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集;
  2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
  3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
  ELISA試劑盒做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意
  1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結果無從談起。
  2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內,包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內。
  3、采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。
  4、檢測標準樣品時,應按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
  5、標準曲線的樣品數一般為7個點,但至少要保證有5個點。
  6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動,但一般來說,相關系數R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999.
 

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